EPI300 Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學感受態(tài)細胞

產(chǎn)品訂購：更大包裝或產(chǎn)品技術問題，請來電/在線咨詢

產(chǎn)品組分：

菌株描述

EPI300菌株有一個突變的trfA基因，該基因表達出的蛋白產(chǎn)物可以促進含有ori V復制子的質粒的高拷貝擴繁，誘導液（CopyCutter Induction Solution）可以誘導trfA基因的表達。當含有ori V復制子質粒的EPI300細胞在LB/2YT或SOB培養(yǎng)基中生長時，trfA基因的表達被抑制，ori V復制子質粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平；當在培養(yǎng)基中加入誘導液（CopyCutter Induction Solution），ori V復制子質粒的拷貝數(shù)可維持在很高的水平，提高了質粒產(chǎn)量。因此EPI300菌株可以降低ori V復制子質粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定 DNA 或毒性基因的克隆。

【更多特征】：

[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型，使EPI300適合于甲基化DNA的有效克??；

endA1的突變確保質?？寺〉母弋a(chǎn)量；recA1的突變確保大分子DNA插入的穩(wěn)定性；

lacZΔM15標記的存在，使EPI300適用于藍白斑篩選；

rpsL賦予EPI300鏈mei素抗性。

EPI300菌株基因型：F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌EPI300菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經(jīng)pUC19質粒檢測轉化效率＞3×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細胞的轉化效率。

2） 在冰上融化感受態(tài)細胞。

3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4） 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

5） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

6） 產(chǎn)品包裝內含載體pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

7） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產(chǎn)物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3） 向每個離心管中加700 μl無菌的2YT或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含所選質粒篩選抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)過夜。如果進行藍白斑篩選，37℃培養(yǎng)至少15h。

【注意】：

a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產(chǎn)物涂布平板。若預計的克隆較少，可通過離心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。 

相關產(chǎn)品

附表1固體和液體LB培養(yǎng)基配方

附表2固體和液體2-YT培養(yǎng)基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產(chǎn)品。

大腸桿菌化學感受態(tài)細胞表達分析大腸桿菌化學感受態(tài)細胞表達分析