Calcein Deep Red AM 鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯

產品關鍵詞：

Calcein, AM 鈣黃綠素AM；Calcein Deep Red 鈣黃綠素深紅色；Cy5； 活細胞染色；Fluorescein diacetate (FDA)；Propidium Iodide（PI）碘化丙啶；

產品信息                                                                                    

【溫馨提示】：見我司（懋康生物）整理的鈣黃綠素（Calcein）系列產品專題，尋找最合適波長的鈣黃綠素活細胞探針。

產品描述

Calcein, AM，中文名鈣黃綠素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一種具細胞膜滲透性zui受huan迎的活細胞熒光染料，用來標記和監(jiān)測活細胞功能，呈綠色熒光（Ex/Em= 490nm/515nm）。然而，Calcein, AM單一顏色使其不能將其用在多重標記實驗，比如，其無法和GFP轉染細胞聯(lián)合使用，因光譜一致。為了解決這一應用缺陷，我司特別開發(fā)出Calcein Red（貨號：MX3013），Calcein Deep Red（貨號：MX3016）這些衍生物，能夠聯(lián)合GFP或FITC等熒光素實現(xiàn)對活細胞的多重標記和功能分析。

我司（懋康生物）提供的鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯（Calcein Deep Red AM）自身無熒光，具有細胞膜滲透性。能夠輕易進入活細胞，被細胞內酯酶水解生成鈣黃綠素深紅（Calcein Deep Red），產生強烈的深紅色熒光（Ex/Em=643/663nm），用標準的Cy5濾片設置檢測。

產品特性

1）  同義名：Calcein Deep Red AM；Calcein Deep Red AM Ester;鈣黃綠素乙酰氧基甲酯（深紅色），鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯；

2）  分子量：~600

3）  純度：≥95%（HPLC）

4）  Ex/Em：643/663nm

5）  溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

應用實例

Fig 1.HeLa細胞（活細胞+固定細胞）經Calcein Deep Red AM（# MX3016）染色的圖片。

保存與運輸方法

保存：-20℃干燥保存，避免強光直射，有效期一年。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2. 本品從冰箱取出后請在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3. 本品對濕度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。儲存液需要分裝避光凍存，且必須緊緊密封蓋子，干燥保存。工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。

4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1、儲存液制備

儲存液配制范圍可為2～5 mM，具體根據(jù)工作濃度來決定，建議提前配制成1000×儲存液。若使用的工作液為5μM，那么可配制5mM的儲存液，即往1mgCalcein Deep RedAM（Mw ~600）內加入333μl細胞培養(yǎng)級別的DMSO（貨號：MS4601A-100ML）即可。儲存液需要根據(jù)單次用量分裝，-20℃避光干燥保存，一定要避免受潮，此種情況下可穩(wěn)定保存數(shù)月。

2、染色工作液制備

于正式實驗前，或溶解Calcein Deep RedAM粉末配制儲存液，或取一管已配制好的Calcein Deep RedAM儲存液并回至室溫使充分融化。用添加有2.5mM丙huang舒的HHBS（Hanks with 20mM Hepes buffer）或其他適當?shù)木彌_液（pH 7.0）稀釋儲存液到5~10 µM工作濃度。

【注1：Calcein Deep Red染色工作液很不穩(wěn)定，需要使用前配制?！?/span>

【注2：許多細胞都含有機陰離子轉運體。因此高度推薦染色工作液內添加2.5mM丙huang舒（有機陰離子轉運體抑制劑），以防止熒光探針泄露到細胞外。】

3、染色步驟

以下是基于96孔板的Calcein Deep Red活細胞染色步驟，僅作參考。具體實驗請根據(jù)自身要求做調整。

1. 細胞準備：于黑框/透明底的96孔微孔板內按照100~10,000個細胞/孔的量鋪板。設置空白孔（不含細胞的培養(yǎng)基）?！咀⒁狻浚好糠N細胞系需要根據(jù)實際情況來確認細胞增殖或細胞毒性誘導的細胞密度。增殖分析，細胞密度相對少些；毒性分析，起始細胞密度高些。建議96孔板的單孔體積為100 µL。

2. 藥物處理：加待測藥物到細胞內處理適當時間（比如24h，48h或96h）。設置空白孔（不含細胞的培養(yǎng)基），加入相應量的待測藥物?！咀⒁狻浚核幬锾砑忧翱刹挥们逑醇毎?。然而，若是藥物是血清敏感性，那在添加藥物前需要吸掉生長培養(yǎng)基和血清因子。替換之細胞用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。

3. 吸掉培養(yǎng)基?！咀⒁猓禾结樇虞d前必須去除培養(yǎng)基】

4. 按照100 µL/孔（96孔板）的量加入Calcein Deep Red染色工作液。

5. 室溫或37℃避光孵育1h。【注意1：適當?shù)姆跤龝r間取決于細胞類型和使用的細胞濃度。每個實驗建議進行孵育時間優(yōu)化。】【注意2：對于懸浮細胞，探針孵育結束后，于800rpm離心2min?！?/span>

6. 用含合適濾光片（Ex/Em= 643nm/663nm）的儀器進行熒光檢測?！咀⒁猓喝绻麩晒獗尘案撸稍跓晒庑盘枡z測前用含2.5mM丙huang舒的HHBS緩沖液替換Calcein Deep Red染色工作液?！?/span>

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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